LeapWal 無血清細胞凍存液 PZ110R含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進入細胞的數(shù)量,我公司無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內(nèi)外進行雙重保護,大大提高了細胞復(fù)蘇存活率。
LeapWal 無血清細胞凍存液 PZ110R細胞復(fù)蘇過程:
(1)提前開啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37度。輕輕的晃動凍存管,注意管內(nèi)凍存細胞的融化情況。當(dāng)管內(nèi)的冰核還有黃豆大小的時候,取出來,用酒精棉擦拭管體,轉(zhuǎn)移到超凈工作臺內(nèi)。
注意:這一步對細胞存活率至關(guān)重要。既要盡快融化,以減少融化過程對細胞的損害;又要盡可能減少細胞在較高溫度停留的時間,以減少DMSO對細胞的毒害。切不可將凍存管放在水浴鍋內(nèi)不管。
(2)將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出,迅速置于水浴鍋中融化,盡量1min融化,時間越短,對細胞影響越小。
(3)打開凍存管管蓋。輕柔的將凍存管內(nèi)的細胞懸液(約1mL)吸取出來,轉(zhuǎn)移到一個預(yù)冷的15mL離心管內(nèi)。緩慢加入10mL細胞培養(yǎng)基(4℃),邊加邊輕搖混勻,滴加完之后蓋上管蓋,輕輕地上下顛倒混勻。將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻,(如細胞冷凍保存液為500ul,則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中,如細胞冷凍保存液位1ml,則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。)
(4)混勻后立即離心,800轉(zhuǎn),3min即可,離心結(jié)束后棄上清,加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。
(5)混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定,通常為5%)。